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你了解操作原代細胞的操作步驟嗎
更新時間:2022-03-17   點擊次數(shù):2032次

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操作步驟
原代細胞是人工模擬細胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境,是提供細胞營養(yǎng)和促進細胞生長增殖的物質(zhì)基礎。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同,英文都是medium。當它是粉劑時,傾向性地稱為培養(yǎng)基,而將粉劑配成液體后,多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。

一、復蘇

 1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

 2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

 3.把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動,使培養(yǎng)皿中的細胞均勻分布。

 4.標好細胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后換培養(yǎng)基。

 5.3天換一次培養(yǎng)基。

 二、傳代

 1.培養(yǎng)皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

 2.把原有培養(yǎng)基吸掉。

 3.加適當?shù)?/span>(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

 4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

 5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。

 6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

 7.倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細胞都吹起來。

 8.根據(jù)細胞種類把細胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個,繼續(xù)培養(yǎng)。

 三、凍存

 把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。

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