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喹乙醇檢測(cè)試劑盒

更新時(shí)間:2016-11-06

簡(jiǎn)要描述:

喹乙醇檢測(cè)試劑盒的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得*好評(píng),其立足于生命科學(xué)領(lǐng)域,全力打造高品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈,也具備豐富的管理經(jīng)驗(yàn),同時(shí)我們建立了集、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系,有激情、有理想,更有責(zé)任感,是您科研道路上值得信賴的伙伴。

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喹乙醇檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(酶聯(lián)免疫法)

喹乙醇檢測(cè)試劑盒原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)組織、飼料等樣本中的喹乙醇(Olaquindox,OQX),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的喹乙醇和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗喹乙醇抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含喹乙醇含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中喹乙醇的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.15ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:37℃,30min~30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
組織………………………………………0.3ppb
飼料………………………………………30ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
喹乙醇……………………………………100%
卡巴多……………………………………﹤0.1%
 2.5 樣本回收率:
組織…………………………………………80±15%
飼料…………………………………………85±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品(黑蓋):各1ml
0ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb、12.15ppb
高標(biāo)準(zhǔn)品(黑蓋):1ppm…………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
2X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說(shuō)明書(shū)………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:無(wú)水乙腈、甲醇
樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣品提取液
   根據(jù)需要量取甲醇用去離子水按甲醇:水=0.5:9.5稀釋,混勻備用。
配液2:復(fù)溶液
    將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 組織(豬肝、豬肉等)樣本
1)稱取2±0.05g去除脂肪的勻漿樣品,加入2ml去離子水、8ml乙腈,充分混勻后置56℃水浴10min,振蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min;
2)取5ml上清液于50-60℃氮?dú)饣蚩諝庀麓蹈伞?br />3)用1ml樣本復(fù)溶液溶解干燥物,加2ml正己烷,充分混勻,室溫4000r/min以上離心5min;
4)去除上層有機(jī)相,取下層液50ul用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):1     檢測(cè)下限:0.3ppb
5.3.2 飼料樣本
1)稱取稱1±0.05g研碎的飼料樣品,加入10ml樣品提取液,充分混勻后置56℃水浴10min,震蕩5min,室溫4000r/min以上離心10min;
2)取50ul上清液,加入450ul樣本復(fù)溶液稀釋,混勻;
3)取2)中稀釋的上清液50ul用于分析。
    樣本稀釋倍數(shù):100     檢測(cè)下限:30ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗    滌:同上
6.6 顯    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
6.7 終    止:加終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.8 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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