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己烯雌酚類檢測(cè)試劑盒

更新時(shí)間:2016-11-06

簡要描述:

己烯雌酚類檢測(cè)試劑盒的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得*好評(píng),其立足于生命科學(xué)領(lǐng)域,全力打造高品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈,也具備豐富的管理經(jīng)驗(yàn),同時(shí)我們建立了集、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系,有激情、有理想,更有責(zé)任感,是您科研道路上值得信賴的伙伴。

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己烯雌酚類檢測(cè)試劑盒使用說明書(酶聯(lián)免疫法)

己烯雌酚類檢測(cè)試劑盒原理及用途
己烯雌酚是甾類同化激素,被大量用于促進(jìn)反芻動(dòng)物的生長。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性,歐美等發(fā)達(dá)國家已相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。我國農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中規(guī)定,動(dòng)物源性食品中己烯雌酚的殘留*為不得檢出。
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測(cè)尿樣、組織、飼料等樣本中的己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES),試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗己烯雌酚抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:37℃,30min~30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
組織(蝦、魚)………………………0.2ppb
豬肉/肝、雞肉/肝……………………2ppb
配合飼料………………………………10ppb
濃縮/預(yù)混飼料………………………20ppb
尿液……………………………………0.6ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
己烯雌酚………………………………100%
雙烯雌酚………………………………38.5%
己烷雌酚………………………………8.5%
己炔雌二醇……………………………<0.1%
雌三醇…………………………………<0.1%
 2.5 樣本回收率:
尿     樣   ……………………… 70%±10%
組     織   ……………………… 85%±10%
飼     料   ……………………… 90%±10%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)品:各1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………11ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
5X復(fù)溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1份
需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:單道20µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:乙腈、氫氧化鈉、丙酮、濃磷酸(含量85%)
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:6M H3PO4 溶液
100ml 濃H3PO4(含量85%)加去離子水150ml混合均勻。
配液2:2M NaOH溶液
    8gNaOH加去離子水100ml溶解。
配液3:1M NaOH溶液
    4g NaOH加去離子水100ml溶解。
配液4:乙腈-丙酮混合液
    V乙腈:V丙酮=4:1
配液5:復(fù)溶液
    將5×復(fù)溶液用去離子水5倍稀釋,用于樣本的復(fù)溶,復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 組織(雞、鴨、豬肉/豬肝、蝦、魚)樣本處理方法 
1)稱取2±0.05g勻漿后的樣本,加入6ml乙腈-丙酮混合液,振蕩2min,15℃4000r/min離心10min; 
2)取3ml上清液,60℃氮?dú)?空氣吹干; 
3)加入0.5ml氯,振蕩20s,加入2ml 2M NaOH,振蕩30s,4000r/min離心5min; 
4)取上清液1ml,加入200µl 6M H3PO4,振蕩5s; 
5)加入3ml乙腈萃取,振蕩2min,室溫4000r/min離心10min,取上層有機(jī)相,60℃氮?dú)?空氣吹干; 
6)用1ml樣本復(fù)溶液溶解干燥的殘留物,振蕩混勻30s。
不同樣本按如下方法稀釋: 
A)蝦魚:直接取50µl水相用于檢測(cè)。 
    樣本稀釋倍數(shù):2    檢測(cè)下限:0.2ppb
B)豬肉/肝、雞肉/肝:取50µl水相加入450µl樣本復(fù)溶液,振蕩混合30s;取50µl用于檢測(cè)。
    樣本稀釋倍數(shù):20    檢測(cè)下限:2ppb
5.3.2 飼料樣本處理方法 
1)稱取2±0.05g搗粹后的飼料樣本,加入8ml乙腈,振蕩2min,15℃ 4000r/min離心10min; 
2)取2ml上清液,60℃氮?dú)?空氣吹干; 
3)加入0.5ml氯,振蕩20s,加入2ml 1M NaOH,振蕩30s,4000r/min離心5min; 
4)取1ml上清液,加入100µl 6M H3PO4,振蕩5s;
不同樣本按如下方法稀釋: 
A)配合料:取50µl,加入950µl樣本復(fù)溶液,振蕩混勻30s,取50µl 用于檢測(cè)。
    樣本稀釋倍數(shù):100    檢測(cè)下限:10ppb
B)濃縮料/預(yù)混料:取25µl,加入975µl樣本復(fù)溶液,振蕩混勻30s,取50µl 用于檢測(cè)。
    樣本釋倍數(shù):200    檢測(cè)下限:20ppb 
5.3.3 尿樣樣本處理方法 
1)取2ml尿液到離心管中,室溫4000r/min離心10min,直至清亮; 
2)移取1ml清亮尿液至離心管中,加入1ml 1M NaOH強(qiáng)烈振蕩5min; 
3)加入100µl 6M H3PO4,振蕩30 s; 
4)再加入8ml氯進(jìn)行萃取,振蕩5min。15℃4000r/min離心10min; 
5)去掉上層的水相,取下層有機(jī)相4 ml,60℃氮?dú)獯蹈桑?nbsp;
6)用3ml樣本復(fù)溶液干燥的殘留物,混合30s;
7)取50µl用于分析。 
    樣本稀釋倍數(shù):6    檢測(cè)下限:0.6ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加抗體工作液50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌:將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,zui后用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 加酶反應(yīng):加酶標(biāo)記物100µl/孔,37℃避光反應(yīng)30分鐘。
6.5 洗    滌:同上
6.6 顯    色:加底物液A 50µl/孔,再加底物液B 50µl/孔,輕輕振蕩5秒混勻,37℃避光顯色15分鐘。
6.7 終    止:加終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.8 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

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