更新時(shí)間:2016-11-06
新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒的服務(wù)和業(yè)務(wù)在同行獲得*好評(píng),其立足于生命科學(xué)領(lǐng)域,全力打造高品質(zhì)生物科技產(chǎn)品鏈和技術(shù)服務(wù)鏈,也具備豐富的管理經(jīng)驗(yàn),同時(shí)我們建立了集、售后服務(wù)等多方位的服務(wù)體系,有激情、有理想,更有責(zé)任感,是您科研道路上值得信賴的伙伴。
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新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)使用說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱】
通用名:新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Newcastle Disease Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 新城疫又名偽雞瘟或亞洲雞瘟,是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的禽類的一種急性高度接觸性傳染病,以呼吸困難、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、粘膜出血為特征。
本試劑用于檢測(cè)雞、鴨、鵝等禽類血清、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體,可用于免疫效果評(píng)價(jià)、輔助診斷等。
【原 理】
本試劑盒系由預(yù)包被新城疫病毒抗原的酶標(biāo)板、抗體工作液、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫法原理檢測(cè)禽類血清、血漿或蛋黃中新城疫病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入稀釋的待檢樣本和抗體工作液,若樣品中含有新城疫病毒抗體則將阻斷抗體工作液與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,從而使后續(xù)反應(yīng)不出現(xiàn)顯色;反之則出現(xiàn)顯色;顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)椋挥妹笜?biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有新城疫病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格(96T×1) | 規(guī)格(96T×2) |
1. | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標(biāo)記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 抗體工作液 (藍(lán)蓋) | 5.5ml×1 | 11ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽(yáng)性對(duì)照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對(duì)照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
12. | 說(shuō)明書(shū) | 1份 | 1份
|
【儲(chǔ)存及有效期】 于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,然后用蒸餾水或去離子水20倍稀釋成工作洗滌液。
2.血清/血漿:取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清或血漿,要求血清/血漿清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
蛋黃:取2ml新鮮蛋黃加2ml生理鹽水震蕩混勻,3000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘,取上清作為樣本。
3.用工作洗滌液將待檢血清、血漿或已處理蛋黃樣本按5倍稀釋(如10μl樣本加入40μl工作洗滌液中,混勻)。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照50μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品50μl。
4.每孔加抗體工作液50μl,混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)15分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照吸光值≥1.0,陽(yáng)性對(duì)照PI≥50%。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.PI(阻斷率)=(1-樣本值/陰性對(duì)照孔均值)×100%,PI≥50%為陽(yáng)性;PI<50%為陰性。
2.未曾免疫雞群:結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)表明可能有感染,需結(jié)合臨床資料進(jìn)行分析。
3.免疫雞群:監(jiān)測(cè)并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平,根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)新城疫病毒抗體,根據(jù)PI值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來(lái)水沖洗。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開(kāi)袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用。
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